Leading with leaders

CORALL试剂盒可以在4.5h内快速完成单分子标签（UMIs）以及链特异性(>99%)的RNA文库构建。Lexogen专有的链置换终止和连接技术，无需片段化，可提供完整的转录表达信息，包括转录的起始和终止位点信息。

产品优势：

完整覆盖转录本信息，从起始到终止位点信息，用于全转录组分析；

4.5小时内即可完成RNA文库构建；

整合UMIs，准确反映转录本信息；

出色的链特异性（>99 %）操作流程；

低起始量（1ng-1μg），兼容mRNA捕获及核糖体去除建库；

适用低起始量或低质量的FFPE样本；

自动化友好。

工作流程：
CORALL文库构建基于特有的链置换终止和连接技术，首先置换终止引物(DSP，包含P7序列)3’端可随机结合到RNA模板上，然后进行反转录延伸，当延伸到下一个DSP时，延伸终止，因此文库构建过程不需要进行片段化。插入片段的大小取决于两个结合到模板RNA上DSP的距离。此外，这种终止可阻止伪第二链的合成，保持出色的链特异性。寡核苷酸连接序列可以与第一链cDNA片段的3’端进行高效的连接,同时引入P5序列和单分子标签（UMIs）。

通过PCR进行第二链的合成和双链cDNA扩增，同时把i7和i5（可选）端index以及簇生成所需的完整接头序列引入到文库中。所有的核酸纯化都使用磁珠，操作流程高度匹配自动化。
CORALL试剂盒中已包含多达96个i7 index 可用于多样本混合分析。此外，还可以选购i5 index以得到最多9,216种不同的index组合(Lexogen i5 6 nt DualIndexing Add-on Kits)。由于UMI信息包含在Read 1中，因此可以直接以低成本对转录本进行唯一分析，可进行精确定量。

性能表现：
CORALL试剂盒表现出非常好的覆盖率、链特异性、ERCC input-output线性关系及序列比对率(Tab.1)。CORALL在多种物种及样本类型中都表现出极好的性能，包括人、小鼠、小型猪、仓鼠、植物和细菌的各种RNA，以及降解的和FFPE RNA样本。

Table 1 | CORALL文库双端比对数据。以~2ng去除rRNA的UHRR(通用的人类参考RNA)进行建库，并在NextSeq 500平台进行测序)PE 150)。将测序数据比对到人类参考基因组GRCG38.94并用Mix2 Sequencing Library
Read 1（version1.4.0.12）软件进行定量分析。
aCoD覆盖率为实际覆盖率与理论覆盖率的偏差(值越低表示偏差越小)。编码蛋白质、反义+ lincRNA的百分比是通过featureCounts、进行计算。

转录本覆盖度：
与竞品T和N相比，CORALL生成的转录组覆盖度与其相当，比较平滑、均一 (Fig. 2)。