​CRISPR/Cas9基因组编辑技术(含斑马鱼)学习会 （11月15-17日 南京）

主讲老师：赵庆顺 教授

南京大学模式动物研究所 遗传学与发育生物学教授

学士（1983-1987年，南京大学）、硕士（1987-1990年，南京大学）

博士（1996-2001，普渡大学）

2001-2003年在杜克大学医学中心进行博士后训练

2003年全职加入南京大学模式动物研究，2006年晋升为教授

往期评价：

评价一：CRISPR/Cas9系统是一种新兴的基因定点编辑技术，越来越被研究者所关注。在赵庆顺教授理论结合实际、幽默接地气的授课方式下，为期两天半的培训轻松且充实，让我从对CRISPR/Cas9技术的毫无所知，到对该技术原理及应用有了的全面认识；同时，结合开展的实验环节，掌握了CRISPR序列的设计，基因组编辑工具的制备及向细胞内递送的方法；熟悉了利用CRISPR技术在动植物中敲入和敲除的过程；了解了CRISPR/Cas9脱靶问题解决方案。通过本次学习，受益匪浅！

评价二：有幸全程聆听赵教授的课，教授授课逻辑性非常强、条理清晰、讲解生动细致、内容丰富。教授知识面很广、知无不答言无不尽，绝对是个专业的研究学者。特别是对哪些技巧和注意哪些关键点讲的非常实用。比较适合从事动物植物细菌等微生物研究人员来学习。课程安排合理，由浅入深，适合不同人群，希望这个班能让更多的科研人员获益。

评价三：我是2016年在上海参加过赵教授的学习班，因我基础比较差，在实际应用过程中遇到了很多的问题，非常感谢南京尧顺禹生物科技有限公司工作人用耐心细致的课后服务。2017年2月主办单位上海玮瑜生物科技有限公司谢老师告知我老学员可以终身免费继续学习，我又去了一次南京。真是每一次都有不同的收获，感谢感谢再感谢，也祝玮瑜公司越办越好。

内容安排：

第一天上午9:00-12:00   下午13:00-17:00

第一讲、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理

1、基因组靶向修饰技术发展简史（从基因打靶到基因编辑）    2、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理         

第二讲、CRISPR的设计

1、CRISPR设计的依据及原则    2、常用CRISPR设计软件简介（CRISPR的在线设计简介）   3、靶向编辑基因的基因型确认及CRISPR的再设计

第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送   2、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送

实验一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1） CRISPR模板的制备

选做实验或参观：模式动物斑马鱼养殖条件规范（江苏省地方标准立项简介）/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第四讲、sgRNA活性验证

1、插入缺失（Indel）突变检测的基本策略   2、基于胚胎反应器的活性验证方法 3、基于细胞系的活性验证方法

实验二： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）

CRISPR模板与线性化All-in-One载体的重组、 转化、 携带基因组编辑工具的转化子的培养

选做实验或参观：斑马鱼胚胎显微注射/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第二天上午9:00-12:00     下午13:00-17:00

第五讲、利用CRISPR技术创制基因组编辑细胞系

1、基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析    2、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）    3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认      4、基因编辑子的功能确认策略

实验三：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）   阳性转化子的快速验证法（PCR法）

实验四：基因组编辑子的基因型鉴定 （1）   基因组DNA模板的快速制备、目标基因组DNA片段的PCR扩增

选做实验或参观：斑马鱼胚胎显微形态学观测/斑马鱼基因编辑突变体的基因型鉴定

第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体

1、RNP基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵   2、初建者（F0）体细胞携带靶向突变等位基因的鉴定    3、基因组编辑突变体的筛选及建系（F1）   4、基因编辑子的功能确认策略   

实验五：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）    电泳确认

实验六：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定 （2）   电泳识别基因组编辑突变体

选做实验：斑马鱼基因编辑突变体的基因型鉴定结果确认/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第七讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞或胚胎中的表达

1、dCas9的特征简介   2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程    3、CRISPR技术的转录抑制   4、CRISPR技术的转录活化   5、碱基编辑技术   6、核酸检测

第八讲、斑马鱼模型在研究疾病发生机制中的运用

1、科学问题的提出    2、与疾病共分离的遗传突变的常见类型    3、评价人突变基因的斑马鱼模型的建立（CRISPRi法基因敲降法、CRISPR法基因敲除、或过表达）    4、斑马鱼模型表型模拟人类疾病临床特征（显微形态学、组织学、转录组学）     5、利用斑马鱼模型解析疾病发生机制研究的一般策略

第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）

第九讲、CRSIPR/Cas9基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶的产生原因    2、脱靶检测   3、解决脱靶问题的方法   4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

自由讨论：如何利用基因组编辑技术和斑马鱼模型回答关键科学问题、提前准备自然科学基金申请的前期研究工作基础。

第十讲 “基因编辑婴儿”事件及CRISPR技术的伦理学问题

1、 “基因编辑婴儿”事件    2、新型基因组编辑技术的发展   3、基因组编辑技术的应用   4、基因组编辑技术应用的伦理学问题

会务说明：

标准间（含早）360元/人   合住180元/人 南京浦口高新区丽景路8号

户名：上海玮瑜生物科技有限公司   

账 户 号：97340154740007035

开 户 行：上海浦东发展银行大华支行

B：支付宝转账

收款人：wybiot@163.com

支付宝户名:上海玮瑜生物科技有限公司

C：现场刷卡或现金：支持公务卡

说明：汇款时写上您的姓名，如果朋友代付一定要注明您本人的名字，便于好查询。

报名邮箱： yunbios@163.com

1、邮件报名：将您的手机姓名和参加班级发送到yunbios@163.com并编辑参会二字发信息到13296073158

2、在线报名：您可以扫描下面二维码在线报名