Draw nucleotides distribution chart(原始数据碱基分布图)
运用统计学方法,统计每个测序循环下所有reads的碱基分布情况。
分析模块通过生成,碱基分布叠层直方图,直观地反应测序reads的碱基分布情况。
常规方式测序(如转录组,基因组)的前几个循环,A、C、G、T的丰度有所波动,后面趋于稳定。一般情况下A与T相等,C与G相等,各碱基所含百分比会因物种的差异而不同,未知碱基所占百分比越低,说明测序文库质量越好。
对于扩增子测序,由于不是随机打断建库测序,不符合以上的碱基分布规律,主要看未知碱基的含量。
对于多重PCR和DNA捕获芯片测序,如果目标区域不大,随机性不足,也有可能出现碱基分布比较杂乱的情况。
输入:
1、测序结果统计报告表,由分析模块 "FASTQ Summary Statistics" 生成。
示例:
1 6362991 -4 40 250734117 39.41 40 40 40 0 40 40 1396976 1329101 678730 2958184 0
2 6362991 -5 40 250531036 39.37 40 40 40 0 40 40 1786786 1055766 1738025 1782414 0
3 6362991 -5 40 248722469 39.09 40 40 40 0 40 40 2296384 984875 1443989 1637743 0
4 6362991 -4 40 248214827 39.01 40 40 40 0 40 40 2536861 1167423 1248968 1409739 0
36 6362991 -5 40 117158566 18.41 7 15 30 23 -5 40 4074444 1402980 63287 822035 245
输出:
测序数据碱基分布叠层直方图。
示例:
The following chart clearly shows the barcode used at the 5'-end of the library: GATCT
In the following chart, one can almost 'read' the most abundant sequence by looking at the dominant values: TGATA TCGTA TTGAT GACTG AA...
The following chart shows a growing number of unknown (N) nucleotides towards later cycles (which might indicate a sequencing problem):
But most of the time, the chart will look rather random:
分析模块引用了FASTX-Toolkit v0.0.13中的fastx_nucleotide_distribution_graph.sh 脚本 (http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/ )。