HRM技术检测分析SNP

      HRM（高分辨熔解曲线）分析技术是近年兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品SNP分析。基于HRM技术主要有短片段法和非标记探针法。

Ⅰ. 短片段法

针对目标SNP位点，设计一对扩增引物，经PCR扩增后直接进行HRM分析。

技术优势

·   操作简便、迅速，真正的闭管操作

·   不受突变位置的局限

·   既可以对已知SNP位点进行分型，也可以对未知突变进行筛查、扫描

·   只检测PCR样品中荧光强度的变化，不消耗任何PCR样品，无污染，PCR产物可以进行下游分析

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Ⅱ. 非标记探针法

      针对目标SNP位点，除设计一对扩增引物之外，另设计一条覆盖目标SNP位点的25nt左右的探针。利用不对称PCR扩增后，经过变性复性，使PCR产物和探针进行结合，然后进行HRM分析。所得的熔解曲线，除在80度左右出现PCR产物熔解峰之外，在60度左右会出现探针的熔解峰。

技术优势

·   相比于短片段法，非标记探针法精度更高

·   同步产生的产物峰可以作为参考

·   只检测PCR样品中荧光强度的变化，不消耗任何PCR样品，无污染

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