KAPA血液直接PCR试剂盒

1、优点

（1）从新鲜血液、4℃保存2年以上EDTA抗凝的全血、FTA®Elute卡、Whatman903样本收集纸（“Guthrie卡”）或常规滤纸血片中直接扩增目的DNA。

（2）无需DNA提取，降低污染风险，缩短时间与节约成本。

（3）与现有的操作流程、实验步骤、常规检测手段兼容。

2、用途

（1）人类、其他哺乳动物和鸟类基因分析；

（2）GC含量<65%，扩增长度3.5kb；GC含量>65%，扩增长度1kb；

（3）可用于常规检测；限制性酶切、琼脂糖凝胶电泳/EB染色、荧光毛细管电泳、DNA测序或dHPLC分析；

（4）特别适合PowerPlex16 System(Promega)进行亲子鉴定；

（5）SNP分析（限制性酶切法）。

3、全血直接扩增

目前的Taq酶无法做到直接从全血中扩增目的DNA片段，主要无法克服血中抑制因子对Taq酶的干扰抑制。KAPA血液DNA聚合酶经过血液抑制剂处理进化，可以从血液中直接扩增目的DNA片段，无需经过预处理或DNA提取。

4、亲自鉴定、微卫星（STR）分析

5、全血限制性酶切分析

6、其他物种的实验

　该试剂盒亦可用于其他非人类的物种，如哺乳动物、鸟类、还可以用于兽医PCR检测。其他物种的血液收集方式与人类的相同。不同的物种的用血量要根据经验来调整。例如，小鼠的用血量远远低于，0.1-5%v/v即可。鸟类血液中含“有核细胞”，所以应通过预实验，将鸟血应稀释成含有接近人类DNA量的浓度。

7、反应参数

1）推荐反应条件

2）充分混合反应体系，稍离心使试剂成份落到管子底部，开始反应；

3）GC含量<65%，扩增长度3.5kb;GC含量>65%，扩增长度≤1k，同时要加入5%DMSO；扩增长片段，加入0.1%（v/v）吐温20效果更佳；

4）本试剂盒仅适用于EDTA抗凝血，其他如肝素钠、柠檬酸、ACD等抗凝素效果不佳；其他样品如口腔拭子、羊水也有不错实验结果报道；

5）人类：反应体系中含有1-20%v/v血，非人类其他物种用血量要通过试验确定，含“有核细胞”的血（如鸟血）要经过稀释，直到达到人类血液DNA浓度为止；

6）PCR产物分析之前，14000-17000g，5min，离心PCR产物，弃掉沉淀颗粒；

7）限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析之前，用试剂盒纯化PCR产物；

8）用本试剂盒可直接扩增出血液中病原体的基因片段，但不推荐用于疾病诊断；

9）该体系中的酶为非热启动酶，常温下有活性，尽量在冰上操作；

10）本试剂盒不适用于SYBR®Green法与Taq探针法荧光定量PCR检测。

8、产品信息