焦磷酸测序（Pyrosequencing）检测

　　焦磷酸测序可在一次检测中快速定量一个或多个甲基化位点，是较为理想的验证方法，该技术在表观遗传学研究中逐渐成为数据分析的金标准。

　 平台基于QIAGEN公司的PyroMark Q96 ID平台，应用焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术，不仅解决了常规的焦磷酸测序法在非CpG位点胞嘧啶转化为胸腺嘧啶时影响到引物的结合的问题，进一步提高了结果的准确性；同时，给予的结果除了能准确定性检测到位点变化情况之外，还能精确地计算频率变化。

技术优势

·   先进的算法设计可优化最佳的实验条件，内嵌式的质控保证数据的准确可靠，全程的软件控制减少人为因素的影响

·   灵敏度高，可测到邻近CpG区域的单个甲基化水平

·   周期短、通量高，1h内可同时平行分析96个样本，一次运行可实现多个续CpG位点定量分析

·   对于样品要求低，适用于新鲜、冷冻和FFPE样本

·   对于检测位点要求低，可检测未知序列信息，覆盖到人类基因组的所有CpG位点

·   除常规的检测位点变化情况外，还可准确计算频率变化

服务内容

1. 样本抽提及质检：对客户提供样本进行RNA抽提，并利用NanoDrop进行样本质检；

2. 甲基化检测：根据不同的实验目的，确定合适的检测方法，完成相应的实验；

3. 报告整理：提供包括实验操作流程、原始数据、分析数据在内的详细实验报告。

样品要求

·   样品类型：细胞、新鲜组织或DNA样品

·   样品量：细胞样品请提供至少1×107个细胞，组织样品请提供至少300mg的组织块或切片，DNA样品请提供5 μg以上的DNA

·   样品质量：基因组DNA无明显降解，主带清晰，大于23Kb，无明显弥散。OD260/280值在1.8～2.0之间，浓度 ≥ 500 ng/μl

·   样品保存：细胞样品或新鲜组织块（切成～50mg的小块）可液氮冻存后，-80℃保存。DNA样品可溶于乙醇或超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融

·   样品运输：样品置于1.5 ml冻存管中，封口膜封好，干冰运输

结果展示