GC-MS Metabonomics
全代谢组又称非靶向代谢组(Untargeted metabolomics),对样本进行全面的、无侧重的检测,通过比较实验组和对照组样本,找出差异代谢产物,结合生物信息分析,找出富集差异通路,整合代谢网络。全代谢组旨在提供一个全面的研究视角来比较差异,通常用于标志物的筛选、分子机制研究及多组学整合分析。
GC-MS全代谢组
GC-MS全代谢组学
基因组的下游产物也是最终产物,是一些参与生物体新陈代谢、维持生物体正常生长功能和生长发育的小分子化合物的集合,主要是分子量小于1000的内源性小分子,GCMS非靶向是通过GCMS平台对限定条件下的特定生物样品中所有代谢组分的定性和定量。
技术的优点
不同的处理方法:1、采用衍生化方案,适合检测极性较强的小分子代谢物;2、采用非衍生化方案,适合检测沸点较低的小分子代谢物;3、采用固相微萃取-顶空进样方案,适合检测易挥发的香味或风味物质。
实验流程
分析内容
送样要求
注:顶空进样的样本最少2g
仪器设备
Aglient 7890B-5977A
1、代谢组研究相对于基因组和蛋白质组研究而言有什么不同之处?
主要特点包括三方面:一、基因和蛋白表达的有效的微小变化会在代谢物上得到放大,从而使检测更容易;二、代谢组学的技术不需建立全基因组测序及大量表达序列数据库;三、因为代谢产物在各个生物体系中都是类似的,所以代谢组学研究中采用的技术更通用。
2、代谢组的样品重复性有什么要求?
代谢组学基于多元统计分析方法进行的,在样品准备上相对于转录组和蛋白质组而言需要更多的重复数据。一般建议植物样品:最少6次,建议8次生物学重复;
模式动物及微生物样品:最少8次,建议10次生物学重复;
临床样品:30次生物学重复以上,如组织样品不好取样,可控制在20次重复以上。
3、靶向代谢检测平台的选择?
GC-MS和LC-MS两种平台各有优势,主要是由目标化合物的理化性质决定,GC-MS适合易挥发性、分子量不太大的化合物,而且,离子源为EI,碎片信息多,有成熟的图谱库,便于化合物检索,对于非挥发性成分则需要衍生化;而LC-MS离子源为APCI或者ESI源,适合做中等或强极性的化合物,分子量范围广,灵敏度高,前处理简单,但是LC-MS的价格要贵点,因此可以根据实际情况选择合适的检测平台。
4、关于代谢组数据库问题,老师经常问起数据库是商业库还是自己建的库,类型?
GC-MS数据库:Nist、feihn;
LC-MS数据库:HMDB、Metlin、自建库。