SILAC定量蛋白质组学


SILAC标记定量


        SILAC技术是由美国Thermo Fisher公司研发的一种多肽体内标记技术。该技术是将重型和轻型13C或15N同位素分别标记在L-赖氨酸和L-精氨酸两种必需氨基酸上。细胞经必需氨基酸培养5-6代后，所有蛋白质均会被标记上同位素。将不同处理因素刺激后的细胞蛋白进行质谱分析，在一级谱图中根据同位素峰型的面积大小进行丰度比对，二级谱图行肽段序列鉴定，即可得到蛋白质组的定性和定量数据。


        凭借体内标记的优势， SILAC标记更好地保留了蛋白质的各种生物学特性，而且标记效果没有偏性。因此，该技术在涉及到蛋白质修饰、蛋白质与蛋白质相互作用、蛋白质与DNA/RNA相互作用等研究中的应用尤为广泛。

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主要仪器设备


Q Exactive™ Plus 组合型四极杆 Orbitrap™ 质谱仪

分辨率：140000 at m/z 200，可选 280000 at m/z 200
扫描速率：最高12 HZ
质量数范围：m/z 50- 6000
应用范围：高通量蛋白质鉴定——复杂样品
                 定量蛋白质组学——iTRAQ/TMT定量
                 修饰蛋白组分析


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‍样品要求


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应用方向


                    ◇   发病机理研究

                    ◇   药物靶点研究

                    ◇   蛋白质修饰研究               

                    ◇   蛋白质与分子互作研究               

                    ◇   特殊功能蛋白质筛选

相关文献

  1. McHugh C A, et al. The Xist lncRNA interacts directly with SHARP to silence transcription through HDAC3. Nature, 2015, 521(7551): 232-236.

  2. Jiang N, et al. In vivo quantitative phosphoproteomic profiling identifies novel regulators of castration-resistant prostate cancer growth. Oncogene, 2015, 34(21): 2764-2776.

  3. Ong S E, et al. A practical recipe for stable isotope labeling by amino acids in cell culture (SILAC).Nat Protoc , 2006, 1(6): 2650-2660.



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