流式检测服务上新了!

1. 生物细胞学（常被用于细胞周期和细胞凋亡的检测）

细胞周期检测：流式中常用碘化丙啶（PI）与DNA结合，其荧光强度与DNA含量成正比，进而反映细胞的增殖状态。如图左，检测分析可得到细胞周期的三个时相（G0/G1、S和G2/M期）的细胞数量。

细胞凋亡检测：利用Annexin-V能与PS高亲和力结合的能力，可以区别凋亡及坏死细胞，因此使用结合FITC的Annexin-V和PI，就可以区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。见图右，Q1区PI单阳性为坏死细胞，Q2区为PI、Annexin-V双阳性细胞群为晚期凋亡细胞，Q3双阴性细胞群为正常细胞，Q4区为Annexin-V单阳性细胞群为早期凋亡细胞。

                    图左 血细胞的周期分析                                   图右 细胞凋亡

2. 免疫学

流式细胞术在淋巴细胞及其亚群分析中得到广泛的应用，可同时检测一种或几种淋巴细胞表面抗原。如利用细胞特异性表面标记和分泌的细胞因子等划分细胞亚群，可以研究不同情况下机体的免疫状态及特定细胞群体的免疫功能。

如图左，将不同淋巴细胞亚群区分开来，并可计算其比例，如此次检测中T细胞中CD4阳性的细胞比例为17.53%、CD8细胞的占比为8.31%，CD4、CD8双阳的细胞为0.16%；图右：流式检测CD8阳性T细胞亚群被激活后分泌细胞因子IFNγ和TNFa。

                     图左 T细胞亚群的划分                       图右 特异性细胞亚群分泌细胞因子

3. 临床医学

临床医学工作中，流式既可以粗略判断细胞群体的变化，也可以精确检测异常细胞群。

• 根据细胞的大小和颗粒度对未染色的新鲜血液细胞进行简单的分析：如图左，绿色区为细胞个体较小，直径6-8μm的淋巴细胞，占白细胞总数的20%-30%；蓝色区为体积最大的单核细胞，直径14-20μm，占白细胞总数的3%-8%；紫色区粒细胞细胞核的形态多样，结构相对复杂，占白细胞总数的50%-70%，直径10－12μm。

• 监测生理过程：如图右，使用流式细胞仪定量检测 CD34+ 造血干细胞的含量（阳性细胞群P2），来决定动员干细胞及采集最佳时间，一般外周静脉血有核细胞中CD34+细胞达到0.001(0.10%）以上时，可以考虑造血干细胞单采术。这也成为监测动员干细胞和计数移植中造血干细胞数量的有效、精确的工具。

  

                        图左 血细胞分类                               图右 CD34+造血干细胞
  

  
  

• 临床免疫性疾病的辅助诊断：流式最大的优点就是特异性和敏感性都很好，检测速度快。临床可通过分析CD55、CD59在粒细胞、红细胞上的表达情况，辅助诊断再生障碍性贫血、阵发性血红蛋白尿（PNH）；T4和T8淋巴细胞比例改变（T4细胞大量减少）是诊断艾滋病（获得性免疫缺损综合征）的重要特征；还可以通过淋巴细胞亚群检测（免疫功能检测，检测T\B\NK细胞)），判断免疫缺陷病、肿瘤病人化疗后的免疫力、及进行病毒细菌感染后免疫状态的评价等。

4. 流式细胞术在临床免疫治疗的应用

近年来，CAR-T细胞免疫疗法，在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上的显著疗效，使其被认为是最有前景也是最热门的肿瘤治疗方式之一。

在CAR-T细胞制备过程中，流式技术至关重要。如：T细胞亚群是从外周血分离的PBMC，因个体差异其细胞成分差异很大，需经过磁珠或流式分选纯化最终获得100%的T细胞；又如要保证病人使用的为来自自身的细胞，必须通过流式细胞术等手段检测CAR表达，来鉴别其为表达CAR的自身T细胞；CAR-T细胞回输采用剂量分次输注，从小到大（中位数1×10⁸）的方式，将制备好的CAR-T细胞回输给患者，流式细胞精确计数方面有独特的优势；CAR-T回输后有患者出现细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome, CRS），T、B淋巴细胞、NK/T细胞和巨噬细胞等释放大量的细胞因子、趋化因子，而这些炎症介质导致的炎性反应会引起组织损伤，导致微血管病变、心脏衰竭甚至死亡，流式可通过检测免疫细胞及细胞因子、趋化因子等，严密监控患者是否发生CRS及感染。由此可见流式细胞术在CAR-T制备、输注后监测都有着重要的作用。