在单/寡量细胞水平，利用smart-seq2技术对带poly（A) 尾的mRNA进行转录组全长扩增，进行文库构建、高通量测序、生信分析。Smart-seq2具有高灵敏性、对cDNA低偏差扩增的特点。除了检测不同样本间表达差异，还可进行新转录本预测、可变剪切分析和SNP分析，适用于细胞异质性研究，以及样本量少而无法进行常规RNA-seq的样品。

一、smart-seq2技术原理

Smart (Switching mechanism at 5’ end of the RNA transcript)-seq2是目前应用广泛的单细胞转录组测序技术。smart-seq2能够以单个细胞RNA为模板，以含有Oligo (dT) 的引物作为逆转录引物，结合在带poly（A) 尾mRNA上，合成第一条链，并且能够在合成的新链末端添加加几个不依赖模版的碱基C，利用逆转录酶的模板转换 (Template-switching) 活性，以新合成的链为模板合成第二条链，得到双链cDNA。逆转录过程在cDNA两端引入相同的引物序列，可以实现对cDNA无偏差扩增，之后通过Tn5转座酶处理、构建文库进行二代测序。

二、技术路线

客户解离组织，分选单细胞(或者寡量细胞）后放入我们提供的裂解液，冻存、干冰寄送。我们收到样品后对RNA进行反转录、cDNA预扩增（质检），质检合格样品进行正式扩增，对cDNA纯化后进行全长或3’端建库。库捡合格后进行测序，测序台 Illumina Novaseq6000，reads长度150bp，之后对数据进行相关分析（详见分析内容和数据结果展示部分）。

三、分析内容

除此之外，我们有专业的分析团队，可以根据您的需求提供个性化分析，与您一起解决分析难题。

四、数据结果展示

参考文献：

Full-length RNA-seq from single cells using smart-seq-2

Nat Protoc. 2014 Jan;9(1):171-81. doi: 10.1038/nprot.2014.006. Epub 2014 Jan 2.

Fixed single-cell transcriptomic characterization of human radial glial diversity

Nat Methods. 2016 Jan;13(1):87-93. doi: 10.1038/nmeth.3629. Epub 2015 Nov 16.

TCR Lineage tracking reveals dynamic relationships of T cells in colorectal cancer

Nature. 2018 Dec;564(7735):268-272. doi: 10.1038/s41586-018-0694-x. Epub 2018 Oct 29.

A brief review of single-cell transcriptomic technologies

Brief Funct Genomics. 2018 Jan 1;17(1):64-76. doi: 10.1093/bfgp/elx019.