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        高特异性：高封闭Taq抗体和优化的PCR缓冲液双重作用大大降低了引物二聚体的产生。

        室温稳定：在储存和运输过程中，性能不容易随温度变化而降低；完全室温配制体系。

        高GC扩增：优化的缓冲液配方可高效扩增GC 含量高达 80% 的模板，从而简化引物设计。

        宽线性范围：可在8个模板梯度线性范围内展示很高的重复性。

1.   高稳定性验证

　　将 pET28a   质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释作为模板，使用 37℃ 下保存一周的 QST-100 和 -20℃ 下保存的 QST-100 同时对稀释好的模板进行定量实验，每孔加样量 5 µL，扩增曲线和标准曲线如图 1-a 和 1-b 所示：

图1 高稳定性验证

Fig.1 Validation of high stability　　

　　结果：从扩增曲线中可以看到 37℃ 下保存一周的 QST-100 和 -20℃ 下保存的 QST-100 扩增曲线一致，CT 值基本接近，从标准曲线中可以看到不同温度下保存的试剂扩增效率均在 95%-100%之间，R2值均为 0.999。

　　结论：QST-100 具有极高的稳定性，同时具有卓越的扩增效率，在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系。

2.   QST-100 与国产 N 品牌特异性对比

　　将 pET28a   质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释作为模板，使用 QST-100 和国产 N 品牌按照各自说明书推荐的体系（模板加样量相同），使用同一程序同时对稀释好的模板进行定量实验，熔解曲线如下图所示：

图2 QST-100 与国产 N 品牌特异性对比

Fig.2 Comparison of specificity   between QST-100 and Brand N

　　结果：从熔解曲线中可以看到，QST-100在低浓度和高浓度模板下均为单一峰值，而在低浓度模板下，国产 N 品牌出现了非特异性扩增。

　　结论：QST-100 熔解曲线峰值单一，具有高特异性，符合 MIQE 要求。

3.   QST-100 与进口 T 品牌扩增效率对比

　　将 pET28a   质粒进行 5 个 10 倍梯度稀释作为模板，使用 QST-100 和进口 T 品牌按照各自说明书推荐的体系（模板加样量相同），使用同一程序同时对稀释好的模板进行定量实验，扩增曲线和熔解曲线如图 3-a 和 3-b 所示：

图3 QST-100 与进口 T 品牌扩增效率对比

Fig.3 Comparison of amplification efficiency between QST-100 and Brand T

　　结果：从扩增曲线中可以看到在同一模板浓度下，QST-100 比进口 T 品牌起峰早，CT 值小。从熔解曲线中可以看到两种试剂均没有出现非特异性扩增， 但QST-100 的 Tm 值低于进口 T 品牌。

　　结论：在没有非特异性扩增产生的情况下，QST-100 扩增效率高，且有利于高 GC 含量模板扩增。

　　qPCR Master Mix 是一款经典定量 PCR 试剂盒，基于 SYBR Green I 染料法的 2×预混液，包含除引物和模板外的所有组分。本产品采用抗体法热启动的 Taq 酶，可进行高特异、高稳定的定量 PCR 分析。该酶通过特殊配方优化，适用于高 GC 含量模板的扩增，可在 37℃ 下 7 天性能保持不变，具有很高的稳定性，推荐室温加样操作。该试剂中已预混 ROX，可兼容大部分定量 PCR 仪。 已在中国科学院、复旦大学、浙江大学等高校研究所大量使用，具有良好的市场口碑。

　　2-8℃保存1年。

FAQ：

1. 问：QST-100 熔解曲线的 Tm 值相比竞品更低，对扩增是否有影响？

    答：对扩增无影响，试剂特殊配比使得 QST-100 的 Tm 值较低，反而有利于扩增高 GC 含量的模板。

2. 问：QST-100 的 CT 值相比竞品较高，是否意味着扩增效率低？

    答：扩增效率的高低需要通过标准曲线来判断，CT 值的高低并不能反映扩增效率。QST-100 的特异性好，不易出现引物二聚体，数据真实，在验证 NTC（无模板阴性对照）无扩增的情况下对比 CT 值的高低具有实际意义。最后需要检查 QST-100 反应体系配制时是否室温融化和加样。

3. 问：使用 QST-100 时可以更改加样体系吗？

    答：该试剂为 2×预混液，使用量为反应总体系的一半，引物和模板的加样量可进行调节，最后加水补足即可。

4. 问：反应结束时无扩增曲线应该如何处理？

    答： （1）反应循环数不够：一般设置循环数为 40，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。

            （2）确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在 72℃ 延伸阶段。

            （3）引物不合适：重新设计引物；确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过 PAGE 电泳检测完整性，以排除其降解的可能。

            （4）模板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

            （5）模板降解：重新制备模板，重复实验。

5. 问：重复性差应该如何处理？

    答：（1）将模板做 5-10 倍稀释，以大体积加入反应体系中。

           （2）定量 PCR 仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。

           （3）模板浓度太低。模板浓度越低，重复性越差，提高模板的加样体积。

           （4）做 4-6 个复孔，删除其中重复性不好的孔，剩余的进行后续计算。