本品介绍:
本试剂盒主要针对小鼠、大鼠、猪、狗灵长类动物以及临床来源组织器官的固定,特比适用于通过转基因或腺病毒注射进行荧光标记(比如GFP、RFP)的样本固定,可有效保护荧光信号的强度和稳定性。完成组织器官固定的样本才可进行后续透明化处理。
固定液A和B使用前需先震荡混匀,随后根据样本类型进行固定处理。
使用步骤:
1、对于可灌注的组织样本:
a、将4度预冷的含25u/ml肝素钠的PBS缓慢灌注入样本的主要血管,至组织内血液完全被冲洗;
b、缓慢持续注入预冷的固定液A至完全渗透;
c、将样本切割为实验所需尺寸,浸泡于固定液A中,4度旋转孵育,时间依组织大小设定;
d、吸去容器中的固定液A,加入固定液B,37度旋转孵育,时间依组织大小设定;
e、吸去容器中的固定液B,加入PBS室温清洗,时间依组织大小设定,随后转入透明化处理步骤。
2、对于不可灌注的新鲜组织样本:
a、将样本切割为实验所需尺寸,浸泡于固定液A中,4度旋转孵育,时间依组织大小设定;
b、吸去容器中的固定液A,加入固定液B,37度旋转孵育,时间依组织大小设定;
c、吸去容器中的固定液B,加入PBS室温清洗,时间依组织大小设定,随后转入透明化处理步骤。
3、对于已固定的组织样本:
a、将样本切割为实验所需尺寸;
b、将样本浸泡于PBS中,室温旋转孵育3小时;
c、将样本浸泡于固定液A中,4度旋转孵育,时间依组织大小设定;
d、吸去容器中的固定液A,加入固定液B,37度旋转孵育,时间依组织大小设定;
e、吸去容器中的固定液B,加入PBS室温清洗,时间依组织大小设定,随后转入透明化处理步骤。