Leading with leaders

      特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检，不可直接用于诊断。             

          极速扩增：本酶最快可实现 1 sec/kb 极速扩增，配合“高速个人型 PCR 仪”，3 kb 片段的扩增仅需 39 min 完成。

          超高保真度：采用进化改造的热启动 KOD 酶，具有 Taq 酶 80 倍以上的保真度，特别适合分子克隆及定点突变。

          超长片段扩增：以人基因组 DNA 为模板可扩增 40 kb 片段，可对超长片段进行高速高保真扩增。

          高特异性:采用聚合酶活性和校正活性双抗体封闭，保证扩增的高特异性及低模板进行扩增。

          高抗抑制能力:兼容粗样品，可对鼠尾、叶片、种子、酵母等样品或简单裂解样品进行直接 PCR。

1.   高速 PCR

          使用 KAO-201 和进口 A 品牌按照各自说明书推荐的体系和程序对人基因组 DNA 进行扩增。KAO-201扩增时，1 kb 的目的片段延伸时间设定为 1 sec，1-10 kb 的目的片段延伸时间按 5 sec/ kb 设定。PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果如下图所示：

图1 高速PCR

Fig.1 Rapid PCR 　　

          结果：从琼脂糖凝胶电泳图中可以看到在扩增 4 kb 及 4 kb 以上的片段时，KAO-201 仍然可以得到清晰的单一扩增条带，而进口 A 品牌出现了模糊多带的情况。

          结论：KAO-201 能够对长片段模板进行高速高保真的 PCR 扩增。

2.   粗样品PCR

          使用 KAO-201 和进口 A 品牌按照各自说明书推荐的体系和程序分别从血液和鼠尾裂解液中 PCR 扩增人的 β-globin 基因和小鼠的 Thy-1 基因。为避免误差，从低到高设置模板加样量为 1 µL、2 µL、3 µL、4 µL，PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳结果如图 2-a 和 2-b 所示：

图2 粗样品 PCR

Fig.2 PCR of   raw sample

          结果：从血液直扩和鼠尾裂解直扩的琼脂糖凝胶电泳图中可以看到，使用 KAO-201 对两个粗样品扩增均可以得到清晰的电泳条带，而进口 A 品牌没有扩增条带。

          结论：KAO-201 高保真酶具有高抗抑制性，能够用于粗样品的 PCR 扩增。

3.   高保真度

           选用多种 DNA 聚合酶并以人基因组 DNA 为模板扩增 β-globin 基因，对各PCR 产物进行 TA 克隆。随后从各克隆中抽提质粒，进行 Sanger 测序并确认序列，最后统计100,000碱基中的错配数用于保真度对比，碱基错配数如下图所示：

图3 高保真度

Fig.3 High fidelity

          结果：普通 Taq DNA 聚合酶在100,000 碱基中的错配数最高，Flash KOD（KAO-201）在100,000 碱基中的错配数最低，保真性大约是普通 Taq DNA 聚合酶的 80 倍。

          结论：KAO-201 具有高保真度，保真性大约是普通 Taq DNA 聚合酶的 80 倍，能有效避免 PCR 扩增中的碱基错配。

          KAO-201 高速高保真 PCR 预混液 2×TOROBlue® Flash KOD Dye Mix 采用新一代改造 KOD DNA 聚合酶为基础开发，含有抑制 5'→3'聚合酶活性和 3'→5'外切酶活性的两种单克隆抗体，具备以下典型特征：

          1. 可进行高特异性热启动 PCR。

          2. 既有其高保真性及高成功扩增效率特点，又有高速延伸的特点，实现最快 1 sec/kb 的高速扩增。

          3. 具有高抗抑制能力，对粗样品，含肌苷或尿嘧啶、高 GC 的引物和模板均具有优异的扩增性能。

          4. 含有电泳上样指示剂，只需加入模板和引物即可进行扩增，PCR 反应完成后直接点样进行电泳。

          名称：2×TOROBlue^® Flash KOD Dye Mix(P)

          货号:    KAO-201P

          规格:    50µL/200次

          -20℃可长期保存。