蛋白芯片样品收集方法

收集全血至普通离心管或者采血管（BD vacutainer公司的红头真空采血管，不含抗凝剂、防腐剂或者分离剂）,室温放置30- 45 min，以3000- 5000 rpm/min离心10 min，取上清检测或者冻存（- 80℃）。

收集全血至BD vacutainer公司的EDTAK2、肝素锂、或者枸橼酸钠等真空采血管，以3000- 5000 rpm/mL离心10 min，取上清检测或者冻存（ - 80℃）。

收集不添加稳定剂的尿液样本，高速离心样本(如10000 g离心1 min或5000 g 离心2 min)，取上清分装，利用干冰或甲醇浴使样本迅速结冻，储存于- 80℃备用。

血清中含有部分细胞因子，所以建议制备无血清或低血清条件培养基。例如，于培养皿或培养板中加入完全培养基，接种细胞；细胞贴壁后，加入含药物的6- 8 ml无血清或低血清（低于2%胎牛血清）培养基作用细胞；待药物作用时间点到达时,确保细胞数目足够多（数量约为106 – 107 ），收集培养上清于15ml离心管中，2000rpm、4℃离心10min，收集上清，分装于1.5 mL EP管，储存于- 80℃中。

细胞上清归一化方法:

对于细胞上清的检测，不同组之间需要接种同样数量的细胞、加入同样体积培养基，培养同样时间后收集样品。

待药物作用时间点到达时,确保细胞融合度达到90%以上（数量约为106 – 107 ）, 将上清吸掉，用PBS (4℃)清洗2次细胞，加入150-200μl细胞裂解液（或者参照您购买的裂解液说明书），快速将细胞从培养板刮下 ,收集细胞裂解液，加入微量离心管中，冰浴30min，期间每10min使用涡旋器涡旋30s。或者吸弃上清，用PBS洗涤细胞2次后，加入PBS刮落细胞，收集于离心管中，2000- 3000rpm 4℃离心10min，弃上清。加入100-150μl细胞裂解液，冰浴30min,期间每10min使用涡旋器涡旋30s。14000rpm 4℃离心混合液10min,吸取清澈上清于干净的离心管中（确保只吸取上层清澈细胞上清，如果上清出现絮状或者浑浊，将细胞裂解液上清转入干净的离心管中，于14000 rpm4℃再次离心15 - 20 min 后取上清）。建议裂解蛋白浓度至少2 mg/ml以上，上样时稀释倍数约5- 10倍，上样浓度建议为500ug/ ml。

待药物作用时间点到达时,确保细胞量足够多,将上清吸掉，用PBS (4℃)清洗2次细胞，加入PBS刮落细胞，收集于离心管中，2000- 3000rpm 4℃离心10min，弃上清, 分装于1.5 mL EP管，储存于- 80℃

将组织切成小块，转移至2 ml离心管，建议20 mg - 100 mg 组织加入500μl裂解液（或者参照您购买的裂解液说明书），使用研浆机将组织打碎，冰浴14000 rpm 4℃离心混合液15- 20 min，将清澈上清转入干净的离心管中（确保只吸取顶层清澈上清，如果上清出或者吸现絮状或者浑浊，将上清转入干净的离心管中，14000rpm 4℃再次离心15- 20 min后取上清）。