蛋白芯片样品裂解方法

一 裂解液的配制

1 将2X Cell Lysis Buffer稀释2倍备用，用蒸馏水或者双蒸水稀释。

2 配制Protease Inhibitor Cocktail：将Protease Inhibitor Cocktail（蛋白酶抑制剂）小管简单离心，然后将盖子打开，加入60ul稀释好的1X Cell Lysis Buffer在小管中，混匀溶解蛋白酶抑制剂。

3 取20ul配制好的蛋白酶抑制剂，加入到1980ul的1X Cell Lysis Buffer中，混匀，即配制好的已添加蛋白抑制剂的细胞/ 组织裂解液，备用。

注：蛋白酶抑制剂可以使用商业化的蛋白酶抑制剂，按照说明书配制即可；

    或者使用2M PMSF蛋白酶抑制剂: 取6.968 g PMSF溶解在200 ml 酒精(100%)，然后稀释400倍使用。

二 组织裂解

4   将配制好的细胞/ 组织裂解液和1X PBS 在冰上预冷；

5   从-80度冰箱取出冰冻组织，取100 mg组织，用手术剪刀将其剪碎至1-3 mm3，转移至2ml离心管，加入200ul细胞裂解液，置冰上保持低温，匀浆机裂解组织，30s--5min（根据具体组织而定）。

6   冷冻离心机离心14000rpm 10min；

7   取上清，分装后在-80度冻存，避免反复冻融；

8   干冰邮寄

注：采用蛋白定量试剂盒定量制备的组织裂解液，蛋白浓度至少大于5mg/ml。

1 将2X Cell Lysis Buffer稀释2倍备用，用蒸馏水或者双蒸水稀释。

2 配制Protease Inhibitor Cocktail：将Protease Inhibitor Cocktail（蛋白酶抑制剂）小管简单离心，然后将盖子打开，加入60ul稀释好的1X Cell Lysis Buffer在小管中，混匀溶解蛋白酶抑制剂。

3 取20ul配制好的蛋白酶抑制剂，加入到1980ul的1X Cell Lysis Buffer中，混匀，即配制好的已添加蛋白抑制剂的细胞裂解液，备用。

4   将配制好的2ml细胞裂解液和1X PBS 在冰上预冷；

5   将细胞板放在冰上进行细胞裂解；

6   用1xPBS将细胞清洗3次，弃去1X PBS，最后一次要彻底吸干1X PBS；

7   加入100-200ul裂解液，然后将细胞刮下来，收集到EP管中；

8   将EP管在冰上放置30min，每隔5-10min涡旋摇匀30s；

9   冷冻离心机离心14000rpm 10min；

10   取上清，分装后在-80度冻存，避免反复冻融；

11   干冰邮寄

PS:   也可以将悬浮细胞离心收集细胞沉淀，然后加适量裂解液进行裂解；

注：蛋白酶抑制剂可以使用商业化的蛋白酶抑制剂，按照说明书配制即可；

    或者使用2M PMSF蛋白酶抑制剂: 取6.968 g PMSF溶解在200 ml 酒精(100%)，然后稀释400倍使用。

     采用蛋白定量试剂盒定量制备的细胞裂解液，蛋白浓度至少大于5mg/ml。