转录组测序
转录组广义上指某个物种或特定细胞在某一生理条件下产生的所有的RNA,包括mRNA、核糖体RNA、转运RNA及非编码RNA等,狭义上指所有mRNA的集合。转录组是研究细胞表型和功能的重要手段。与基因组不同的是,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不完全相同的。转录组测序是指利用第二代高通量测序技术进行cDNA测序,全面快速地获取某一物种特定器官或组织在某一状态下的几乎所有转录本。相对于传统的基因芯片技术而言,转录组测序无需预先设计探针,即可对任意物种的任意细胞类型的转录组进行检测;能够提供更精确的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的强大工具,目前已广泛应用于各物种的基础研究、临床诊断和药物研发等领域。
技术路线
样品要求
细胞、新鲜组织或RNA样品
样品量
细胞样品请提供至少1×107个细胞,组织样品请提供至少300mg的组织块或切片,RNA样品请提供10 μg以上的总RNA.
真核
RNA样品总量: ≥1.5μg
RNA样品浓度: ≥50ng/μL
样品纯度:OD260/280=1.80-2.00,RIN≥7.0 28S/18S≥1.0
原核
RNA样品总量: ≥1.5μg
RNA样品浓度: ≥65ng/μL
样品纯度:OD260/280=1.80-2.00,RIN≥7.0 23S/16S≥1.0
样品保存
细胞样品或新鲜组织块(切成~50mg的小块)可用TRIZOL或RNA保护剂处理或液氮冻存后,-80℃保存。RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融
样品运输
样品置于1.5 ml管中,封口膜封好,干冰运输.