一、样品准备及样品量
iTRAQ&TMT | GC-MS | LC-MS | NMR | |
植物茎叶 | ≥0.2g | |||
植物根果实 | ≥0.5g | ≥0.2g | ≥0.2g | ≥0.2g |
动物组织 | ≥0.02g | |||
血清 | ≥200ul | ≥200ul | ≥200ul | ≥500ul |
尿液 | ≥1ml | |||
泪液 | ≥1ml | |||
细胞 | ≥10^6 个 | |||
菌体 | ≥10^8 个 | |||
蛋白 | ≥300µg | |||
土壤 | 60g | 60g | 60g | |
粪便 | ≥1g | ≥1g | ≥1g |
二、取样及保存运输
1,植物或动物组织:收集的组织于液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存。
2,动物血液样品制备建议操作:抽取的血液加抗凝剂,防止溶血,4000-5000转/分钟,于4℃温度下离心15-20分钟,待血细胞完全沉降都管底后,吸取上层血浆,用进口的1.5 mL离心管分装保存,最好保存两管,以保证两次实验的量。
3,代谢组检测实验动物尿液:用代谢笼收集动物尿液时,可在收集管中预先加入一定量的叠氮化钠(叠氮化钠在尿液中的终浓度最好在0.05%-0.15%的范围内,0.05%为质量体积浓度),若没有叠氮化钠,那么尿液的收集杯在收集尿液时最好在冰浴中进行。收集好的尿液10000-15000转/分钟,于4℃温度下离心10分钟后,吸取中层澄清的尿液,用进口的1.5 mL离心管分装保存,最好保存两管,以保证两次实验的量。
4,代谢组检测人尿液:收集尿液的前一天饮食要清淡,收集早晨起来第一泡尿液的中段,用进口的1.5 mL离心管分装保存,最好保存两管,以保证两次实验的量。
5,代谢组检测细胞:倒掉培养基,用生理盐水(Nacl/H2O,0.9%,w/v)或PBS快速清洗三遍,用移液枪彻底吸尽清洗液后,加少量液氮猝灭细胞。液氮猝灭后,每皿加入1.2 mL于-20℃预冷的甲醇-水(2.5:1,v/v)溶液,用细胞刮刀刮下细胞,并完全转移至1.5 mL进口离心管中,于-80℃冻存,细胞的数目500万个以上为宜。
6,所有样品取好后如需长时间保存,均需放入-80度冰箱或液氮中冻存。
7,样品由客户送达至公司时,务必采用干冰寄送,江浙沪等较近区域5-10公斤干冰,其他省份十五公斤干冰以上。常用运输方式为韵达快递或顺丰快递陆运。