定点甲基化修饰

技术简介：

甲基化是表观修饰的重要部分，DNA甲基化可以引起DNA构象、稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而影响基因表达。DNA链中含有很多CpG结构，双链DNACpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化，基因组中60~90%的CpG都被甲基化，未甲基化的CpG成簇出现在基因启动子核心序列或者转录起始位点。

DNA甲基化转移酶可以催化CpG的甲基化反应。DNA甲基化转移酶有两种，Dnmt1是一种持续性甲基化转移酶，作用于只有一条链甲基化的DNA双链，使其完全甲基化，参与DNA复制过程中新合成链的甲基化修饰；Dnmt3a/Dnmt3b是一种从头甲基化转移酶，可以在CpG上产生新的甲基化修饰，首先半甲基化，继而全甲基化，该甲基化转移酶可能参与细胞生长分化的调控，在肿瘤基因甲基化中起到重要作用。

近年来CRISPR/Cas9技术得到快速发展，在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一个Dnmt3a，能够通过dCas9介导特定位点的甲基化修饰，调控相关基因的表达。

技术优势：

l   可实现特定DNA区域的甲基化修饰；

l   甲基化修饰效率可达80%以上；

l   可实现高效的基因表达调控。

实验流程：

载体信息：

方案选择：

服务标准：

客户提供：

1、目的修饰位点基因信息；

2、目的细胞（可选择由云生物代购）；

3、完全培养基1-2 L（派致提供DMEM及1640常规培养基）。

云生物交付：按指定方案构建的细胞系及项目报告。

交付周期：8-20周，具体时间取决于靶点复杂程度及细胞生长情况。