本文通过PBA技术，首次在心血管疾病领域实现了单外泌体表面蛋白组学分析，解析出17个异质性EV亚群，发现DSCAML1阳性外泌体亚群在AMI中特异性富集。通过体外功能实验与小鼠心肌梗死模型验证，证实DSCAML1-EVs具有促进心肌修复和血管新生的治疗潜力。进一步结合RNA测序，发现其通过上调EREG基因并选择性激活下游ERK信号通路，从而发挥促血管生成与心脏保护作用。

PBA样本: 人血浆，健康对照（n=13）、冠状动脉粥样硬化狭窄（n=13）和急性心肌梗死（n=13）

Figure 1：Proximity barcoding assay (PBA) for single-EV proteomic biomarker analysis in plasma from healthy controls (HC), coronary artery stenosis (CAS), and acute myocardial infarction (AMI) patients.

• A：三组血浆中检测到的 EV 数量，组间无显著差异
• B：三组检测到的总蛋白数量
• C：单个 EV 上平均蛋白数（约 6.76 个）
• D：所有样本差异蛋白表达热图，显示组间蛋白谱差异
• E–G：火山图展示 CAS vs HC、AMI vs HC、AMI vs CAS 的差异蛋白
• H：6 个关键蛋白（DSCAML1/CR1/ACE2/FN1/CDH15/C5b-9）在 AMI 组显著升高
• I：ROC 曲线证明这些蛋白可有效区分 AMI 与健康人，DSCAML1 的 AUC=0.7692
  

Figure 2：Alterations of EV subpopulations in plasma from HC, CAS, and AMI patients

• A：FlowSOM 无监督聚类将 EV 分为17 个亚群，t-SNE 可视化
• B：各簇高表达特征蛋白（≥70% EV 表达）
• C：17 个亚群在 HC/CAS/AMI 中的分布比例
• D：单样本 t-SNE 分布图，展示组间 EV 亚群差异
• E：簇 1、8、9 主要来源于 AMI 患者
• 簇 1（DSCAML1+）：AMI 占 64.18%
• 簇 8（ALCAM+）、簇 9（CR1+）：AMI 占比均超 50%
• F：簇 1/8/9 中 Top10 蛋白表达频率

Figure 3：Plasma EVs from AMI and CAS patients enhance endothelial cell function.

1. A：NTA 显示血浆 EV 直径约 60 nm
2. B：TEM 电镜图，EV 呈典型杯状 / 球形膜结构
3. C：WB 验证 EV 标志物（CD63/Alix/Syntenin-1）阳性，Calnexin 阴性
4. D：HUVEC 可有效摄取 PKH26 标记的 EV
5. E–F：AMI-EV、CAS-EV 显著提高 HUVEC 活力与增殖
6. G–H：AMI-EV 最强促进 HUVEC 迁移
7. I：AMI-EV 显著促进 HUVEC 血管成管
   

Figure 4：DSCAML1-EVs promote angiogenesis in HUVECs.

1. A：构建过表达 DSCAML1/CR1/ACE2 的 293T 稳转株
2. B：重组 EV 电镜图，形态典型
3. C：WB 验证 EV 高表达对应蛋白，并表达 HSP70、ALIX
4. D：重组 EV 浓度与粒径分布（约 80 nm）
5. E：HUVEC 可有效摄取各类重组 EV
6. F–G：DSCAML1-EV 显著提升 HUVEC 活力与增殖
7. H–K：DSCAML1-EV 促迁移能力最强
8. L–M：DSCAML1-EV 促血管成管效果最显著

   

Figure 5：DSCAML1-EVs mediate myocardial repair and angiogenesis in mice.

1. A：小鼠心梗造模与 EV 治疗方案
2. B：Cy5 标记 EV 可在缺血心脏富集
3. C：TTC 染色显示 DSCAML1-EV、ACE2-EV 缩小心梗面积
4. D：Masson 染色显示 DSCAML1-EV 减轻心肌纤维化
5. E：H&E 显示 DSCAML1-EV 减轻心梗区炎症浸润
6. F：超声心动显示 DSCAML1-EV 显著提升 LVEF、LVFS
7. G：TUNEL 显示 DSCAML1-EV 最强抑制心肌细胞凋亡
8. H–I：CD31、α-SMA 染色显示 DSCAML1-EV 最强促进血管新生
   

Figure 6：DSCAML1-enriched EVs regulate EREG expression and activate the ERK signaling pathway in HUVECs.

1. A：RNA-seq 显示 DSCAML1-EV 处理后 509 个差异基因
2. B：KEGG 富集到MAPK 信号通路最显著
3. C：差异基因与通路关联弦图，突出 EREG
4. D：qPCR 验证 DSCAML1-EV 上调 EREG mRNA
5. E–F：WB 与免疫荧光证实 EREG 蛋白升高
6. G：DSCAML1-EV 特异性激活ERK 磷酸化，不影响 p38/JNK
   

本研究通过单囊泡蛋白质组首次发现DSCAML1 阳性 EV 亚群是急性心肌梗死的新型特异性诊断标志物，并证实其通过EREG/ERK 通路促进心肌修复与血管新生，兼具诊断与治疗双重转化价值，为心梗的精准诊疗提供全新方向。