平台使用ABI ViiA7和ABI7900实时荧光定量PCR仪,用染料法或Taqman探针法对RNA 进行Real Time PCR定量测定或定性鉴定。技术灵敏度高、线性范围宽、特异性好、重复性佳,可进行相对定量及绝对定量检测。
服务优势
· 实时监测:通过扩增曲线能够实时地观察到产物的增加,直观地看到反应对数期
· 到达阈值的循环数和样品的起始模板浓度之间呈线性关系,减少假阴性、假阳性的出现
· 采用先进的分析软件,结果分析更加快捷
· 严谨的科学态度,进行溶解曲线终点分析,验证扩增产物的特异性
服务特色
· 最先进的设计软件,确保探针及引物设计的特异性
· 探针法或染料法定量分析,一切以客户需求为导向
· 探针合成委托国内最好的合成公司,确保探针质量
· 染料法采用2 -ΔΔc(t) 法,操作简便,节约时间
· 正式实验前先进行预实验,慎重对待客户的委托
· 普通PCR无扩增条带的基因,保证再做一次重复验证
· 报告详尽,数据可靠,结果真实,实验科学
服务内容
1. 制定个性化实验方案:根据不同的实验目的确定适合实验方法、选定合适的内参;
2. 样本抽提及质检:对客户提供样本进行RNA抽提,并利用NanoDrop进行样本质检;
3. 定量PCR预实验:包括样本反转录为cDNA、配置PCR反应体系及进行Real-Time PCR反应;
4. 正式定量PCR实验:根据预实验结果进行正式实验;
5. 数据分析:采用2 -ΔΔc(t) 法进行分析,比较不同样本间差异。
服务要求
1. 客户需提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的总RNA/DNA(大于 2 μg/ 样品);
2. 请通过E-mail提供已知的全长基因序列或GeneBank号;
3. 请提供尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、基因丰度等。
操作流程
1. 根据基因序列设计特异性引物和荧光探针;如果是用染料法,则只需设计特异性的引物;
2. 提取合格的DNA/ RNA ;
3. 预实验;
4. 荧光定量PCR,进行实验结果分析;
5. 实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。