污水排放影响微生物群落并促进抗生素抗性基因的水平转移过程

世界范围内,污水处理厂的污水排放对周遭环境的微生物群落都会造成重要影响,污水中含有的可移动遗传原件(MGEs),抗生素抗性基因(ARGs,以及具有抗性的微生物(ARBs)会伴随污水释放入外界环境中,这其中会对外界环境造成什么样的影响?


研究设计

美国密歇根湖沿岸两个污水处理厂

分别记为MTP和STP

MTP

STP

滴流过滤器过滤处理

活性污泥处理

处理厂最后一个处理槽

排水口下游12个位点

处理厂最后一个处理槽

排水口下游5个位点

  • 取样:

    水体+底泥

  • 测序方法:

    Hiseq 2500   PE100   shotgun 宏基因组测序

  • 采样点位置信息如下:

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Result

01

首先研究了污水排放对下游湖泊底泥中基因分布的影响:越靠近排水口位置,湖泊底泥微生态中与污水处理厂排放的水体中相同基因的数量越多,且丰度比例越大。在MTP组中,M5M7位点上,底泥宏基因组中含有大量与污水样本一样的基因,但在距离较远的M1,M10M11位点上,则未检出一样的基因(下图B);STP组中也发现的类似的情况(下图D)。

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为了检验这些一样的基因是否是由于污水处理厂排放污水的影响,研究者从密歇根湖的其他位点进行了取样检测,在距离排放口100-200km的位点,未检出一样的基因,这说明污水排放对远距离的位点微生态影响有限。

      02

污水处理厂出水对密歇根湖底沉积物中微生物群落构成的影响。基于宏基因组组装结果进行物种注释,基于门和属水平开展分析,发现污水排放对物种的门水平变化影响不大,但有一些物种随距离变化在沉积物中的丰度会显著性降低,另有一些随距离增加,相对丰度会更高的物种,如下表(属水平)


MTP

STP

随距离增高丰度比例下降

Bacteroidetes;

Fusobacteria;

Spirochaetes

Chlamydiae;

Firmicutes

随距离增高丰度比例上升

Cyanobacteria;

Chrysiogenetes;

Nitrospirae;

Nitrospinae

Proteobacteria

在MTP及STP样本中,有一些共有的随距离变化丰度下降的物种, 如:Helicobacteraceae, Legionellaceae, MoraxellaceaeNeisseriacea等微生物类群,另外,在MTPSTP中也分别有各自独特的变化微生物类群。

03

污水排放及下游沉积物中有一些物种与致病性相关,所以研究中分析了污水排放与致病性微生物类群的毒力因子:虽然研究鉴定了毒力相关基因,在排水下游位点中有毒力相关基因存在,但在密歇根湖中部,未发现与排放的污水中一致的毒力相关基因。

04

污水处理厂出水对抗生素耐药性组成及丰度的影响:从两个污水处理厂中共检测出16个抗生素抗性基因(ARGs)类群(下图A),两个处理厂中检测到的ARGs类别相似,但MTP组中丰度较STP组中高一倍。除了dfeEstrA基因外,其他ARGs可编码多种抗性相关泵。

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05

ARGs分布研究表明越靠近排水口,ARGs的丰度越高。并且距离排水孔越远,湖泊沉积物的ARGs构成越不相同(下图)。这表明,污水通过排放影响了周边环境的ARGs构成。

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此外,如果ARGs位于质粒上,则很容易通过基因水平转移(HGT)的方式扩散到其他个体中。比对研究发现污水处理厂的污水中,ARGs位于质粒上的比例均较高,下游湖泊沉积物中也发现了广泛扩散性的ARGs,相较于湖中心的位点(LMS),排水孔周围的沉积物中ARGs分布比例更高(下图)。


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06

研究中针对抗性基因微生物的分布开展评估,以评价那些微生物会携带抗性基因通过水平转移的方式进行扩散。令人惊讶的是,底泥样本中大多微生物都携带有ARGs,并且在污水和底泥样本中均广泛分布,如ProteobacteriaCyanobacteria。但也有一些抗性基因,如strA,会被不同类型的微生物携带——如MTP污水样本中,它多见于Proteobacteria, BacteroidetesActinobacteria;但在MTP的底泥样本中,则分布于CyanobacteriaProteobacteria,反而在Actinobacteria中不存在。

参考文献

Metagenomics reveals the impact of wastewater treatment plants on the dispersal of microorganisms and genes in aquatic sediments. Applied and Environmental Microbiology, 2018.

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