PACBIO RS Ⅱ测序样品要求

1、样品纯度：OD 260/280值应在1.8～2.0 之间，OD 260/230值应在2.0～2.2 之间；对于纯度不足的样品，我们将及时通知客户。若客户在样品纯度不合格的情况下要求建库，我公司将不承担建库失败风险，按建库成功收费。

2、样品浓度：样品的浓度越高越好，最低不应低于30 ng/ul；对于PACBIO测序的样品，建议使用PicoGreen染色或用Qubit 分光光度计（ Life Technology）进行检测。

3、样品的量：

注意：上述所需 DNA 是理论值（单次），考虑到运输途中降解、建库可能的重 复，所以一般需要客户提供>10ug 的 DNA，如果构建 10kb 以上文库，通 常需要至少提供 20ug DNA。

4、我们收到样品后，需要对样品进行检测，最终样品的量和纯度，以我们的检测结果为准；对于样品量不足的样品，我们将及时通知客户。若客户在样品量不足的情况下要求建库，我公司将不承担建库失败风险，按建库成功收费。

5、确保样品为双链DNA。单链DNA不能进行SMRTbell模板制备，且会影响定量和聚合酶的结合。

6、尽量避免样品有冻融过程，确保样品没有放置于高于65°C的环境中超过1h，样品不能暴露于pH小于6 或者 高于9的极端环境中。

7、基因组DNA不能有RNA或蛋白污染，电泳检测不能有弥散条带，要求提供电泳图结果。

8、确保样本不包含不溶物质，不能有颜色或者絮状物。

9、不能曝光在荧光染料或者紫外线中。

10、不能包含螯合剂(如EDTA)，二价金属阳离子(如Mg 2+)，变性剂(如胍盐，酚)或者洗涤剂(如SDS，Triton-X100)。

11、不能遗留生物组织中的一些污染物，组织，如(血红素，腐植酸，多酚)等。

12、样品运输方式：DNA 样品可溶解于 Tris 缓冲液中（如 10mM Tris， PH 为 7.0~8.0）或无核酸酶的水中，样品的最大体积不得超过130ul，溶解用的缓冲液中不含 EDTA。 纯化的 DNA 样品非常稳定，建议以冷冻（干冰）的方式运输样品，一方面保证无细菌污染，另一方面也可以减少样品的挥发。如提供样品方需要使用其他材料运输样品试剂，必须在运输样品前书面告知接收样品方该材料的性质及潜在可能性，并把相关信息明显标注于运送样品试剂的包装封面上。由于提供样品方的过失造成的任何损失，由提供样品方承担责任。

13、请客户仔细纯化样品，尽量避免污染进入，并请客户将所送样品保留备份，我们也将另外由专人保留一份备份，以防止一旦数据中出现外源DNA污染，我们能迅速的查清原因，分清责任。