悬浮细胞ChIP

ChromatinImmuno Precipitation(ChIP) protocol

对于悬浮细胞

1) 室温300×g离心10min收集悬浮的细胞；

2) 弃上清；

3) 使用42.5 ml新鲜的无血清培养液彻底重悬细胞。吹打混匀以打散细胞团；

4) 一次性快速加入1.25ml的37%甲醛溶液，进行染色体的交联反应。甲醛终浓度为1%，颠倒混匀数次；

5) 室温精确孵育10min，每1-2min轻柔颠倒混匀；

6) 一次性快速加入5ml的2.5M甘氨酸，终止交联，混匀；

7) 室温孵育5min，然后置于冰上至少15min以彻底中止反应；

8) 将细胞混匀然后按25×106每份分离细胞；

9) 800×g离心10 min，收集交联的细胞；

(800g离心不下来的话，可以用更高速离心1min)

10) 吸去上清，需要尽可能干净的去除上清液；

11) 制备完成的细胞可以直接用于下步裂解。

（用液氮速冻并置于-80°C储存可以至少1.5年）

如需开展后续的项目务必使用干冰冷链物流运输至云生物实验室。