脑脊液中可溶性 TREM2 的蛋白基因组学研究为阿尔茨海默病提供新见解并鉴定新型调控因子
一、样本
这篇发表于《Molecular Neurodegeneration》的研究，为解析可溶性 TREM2（sTREM2）的遗传调控机制及 AD 关联，对样本进行了严格筛选与设计：
样本类型：核心样本为脑脊液（CSF），因 sTREM2 作为微胶质细胞活化标志物，在脑脊液中直接反映中枢神经系统病理状态，是 AD 研究的黄金样本类型；同时结合血浆样本开展交叉验证，提升结果转化价值。
样本规模与人群：纳入 3350 名欧洲血统个体，构建了目前最大的 sTREM2 相关基因组关联研究（GWAS）队列，大样本量确保了遗传位点挖掘的统计学效力，避免偶然结果干扰。
样本质控标准：需排除严重肝肾功能不全、其他神经系统疾病（如路易体痴呆、血管性痴呆）及急性炎症患者，同时严格控制样本采集、储存过程中的温度稳定性与污染风险，保证 sTREM2 蛋白完整性与检测准确性。
配套数据要求：同步收集受试者 APOE 基因型、AD 临床表型（如认知功能评分）、淀粉样蛋白 PET 成像结果等，为蛋白 - 基因组关联分析及功能验证提供多维支撑。
二、技术路线
研究采用 “遗传筛选 - 功能验证 - 技术支撑” 的闭环路线，将基因组学与蛋白组学深度融合：
第一步：全基因组关联分析（GWAS）：对 3350 名受试者的脑脊液 sTREM2 水平进行 GWAS，初步锁定 4 个关键遗传位点（包括 MS4A 基因座、TREM2 基因座、TGFBR2-RBMS3 区域及 APOE 相关区域）。
第二步：精细定位与功能注释：通过多民族精细作图，识别出驱动关联的核心变异（如 MS4A4A 的 p.M178V、MS4A6A 的 p.A112T），并利用表观遗传学数据（如小胶质细胞特异性染色质环）注释调控元件，明确 TGFBR2、Nectin2 等基因的潜在调控作用。
第三步：细胞功能验证：通过过表达与敲低实验，证实 TGFBR2 可直接调控 sTREM2 水平，Nectin2 过表达则显著升高 sTREM2，验证了遗传关联的功能性因果关系。
核心技术支撑：NULISA（核酸连接免疫夹心测定）技术结合靶向质谱（SRM）、高通量测序等技术，实现脑脊液中 sTREM2 及关联蛋白的高灵敏度、多维度检测。
三、文章结果
1、曼哈顿图显示 4 个显著关联位点（-log10P>5×10⁻⁸），Q-Q 图验证无显著群体分层（λ=1.03），证实遗传位点与 sTREM2 水平的关联可靠性，排除假阳性结果
2、展示 MS4A、TGFBR2-RBMS3 区域的连锁不平衡（LD）结构，标注核心变异及候选基因的位置，锁定驱动关联的核心变异，缩小功能候选基因范围
3、左：Western blot 检测过表达 / 敲低后 sTREM2 蛋白条带；右：量化柱状图（均值 ± 标准差），直观呈现调控因子对 sTREM2 的影响幅度，提供功能证据
4、左：sTREM2 标准曲线（检测范围 1aM-1nM）；右：NULISA 与 Simoa 检测结果相关性散点图（r=0.92），验证 NULISA 技术的灵敏度、动态范围及可靠性
5、展示 sTREM2 与 120 余种标志物的相关系数，红色标注显著相关（P）的标志物，揭示 sTREM2 在 AD 病理网络中的核心关联地位
6、对比不同基因型组合的 AD 发病风险比（HR 值），携带双变异型 HR=3.2（95% CI：2.1-4.8），证实通路级遗传交互对 AD 风险的影响，为靶向治疗提供依据
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